Định lượng axit nucleic trong quang phổ kế
Định lượng axit nucleic là chức năng được sử dụng thường xuyên nhất của máy quang phổ. Oligonucleotides, sợi đơn, sợi dây đôi, và RNA có thể được định lượng trong bộ đệm. Đỉnh hấp thụ của đỉnh hấp thụ cao nhất của axit nucleic là 260 nm. Mỗi axit nucleic có thành phần phân tử khác nhau và do đó có các yếu tố chuyển đổi khác nhau. Để định lượng các loại axit nucleic khác nhau, hãy chọn hệ số tương ứng trước. Ví dụ, độ hấp thụ của 1OD tương đương với 50 μg / ml dsDNA, 37 μg / ml ssDNA, 40 μg / ml RNA và 30 μg / ml Olig, tương ứng. Giá trị độ hấp thụ sau khi thử được chuyển đổi theo hệ số trên để thu được nồng độ mẫu tương ứng. Trước khi thử nghiệm, chọn quy trình chính xác, nhập thể tích dung dịch gốc và dung dịch pha loãng, và kiểm tra các dung dịch mẫu trắng và mẫu thử. Tuy nhiên, thí nghiệm không dễ dàng. Các bài đọc không ổn định có thể là nhức đầu lớn nhất cho các thí nghiệm. Độ nhạy của thiết bị càng cao thì độ hấp thụ trưng bày càng lớn.
Trên thực tế, nguyên tắc thiết kế và nguyên tắc làm việc của máy quang phổ cho phép giá trị độ hấp thụ thay đổi trong một phạm vi nhất định, nghĩa là thiết bị có một mức độ chính xác và chính xác nhất định. Chẳng hạn như độ chính xác Biophotometer Eppendorf ≤ 1.0% (1A). Kết quả của nhiều thử nghiệm này khác nhau giữa mức trung bình là 1,0% và tất cả đều bình thường. Ngoài ra, các tính chất lý hóa của axit nucleic, độ pH của dung dịch đệm để hòa tan axit nucleic, nồng độ ion, vv cũng phải được tính đến: Trong quá trình thử nghiệm, nồng độ ion quá cao cũng sẽ khiến cho việc đọc trôi dạt như TE, điều này sẽ giúp ổn định việc đọc. Nồng độ pha loãng của mẫu cũng là một yếu tố không đáng kể: do sự hiện diện không thể tránh khỏi của các hạt nhỏ trong mẫu, đặc biệt là các mẫu axit nucleic. Sự hiện diện của những hạt nhỏ này gây trở ngại cho hiệu ứng thử nghiệm. Để giảm thiểu ảnh hưởng của các hạt trên kết quả thử nghiệm, độ hấp thụ của axit nucleic được yêu cầu ít nhất là 0,1 A và độ hấp thụ tốt hơn là 0,1-1,5 A. Trong phạm vi này, không được có bong bóng trong hỗn hợp, và không có hệ thống treo trong chỗ trống. Nếu không, các bài đọc trôi dạt dữ dội; cùng một cốc đo màu phải được sử dụng để kiểm tra mẫu trắng và mẫu thử; nếu không, chênh lệch nồng độ quá lớn; hệ số chuyển đổi và đơn vị nồng độ mẫu là như nhau; Chiếc cuvette đeo bên cửa sổ; thể tích mẫu phải đạt nhiều hơn khối lượng tối thiểu yêu cầu của cốc màu, v.v.
Ngoài nồng độ axit nucleic, máy đo quang phổ cho thấy một số tỷ lệ rất quan trọng đồng thời để cho biết độ tinh khiết của mẫu, ví dụ như tỷ lệ A260 / A280, với mục đích đánh giá độ tinh khiết của mẫu, vì đỉnh hấp thu của protein là 280 nm. Các mẫu tinh khiết có tỷ lệ lớn hơn 1.8 (DNA) hoặc 2.0 (RNA). Nếu tỷ số nhỏ hơn 1,8 hoặc 2,0, nó chỉ ra sự hiện diện của protein hoặc các chất phenolic. A230 chỉ ra rằng có một số chất ô nhiễm trong mẫu, chẳng hạn như carbohydrate, peptide, phenol, vv Tỷ lệ axit nucleic tinh khiết A260 / A230 lớn hơn 2.0. A320 phát hiện độ đục của dung dịch và các yếu tố nhiễu khác. Mẫu tinh khiết, A320 nói chung là 0.
Công ty chuyên bán máy quang phổ , chào đón khách hàng có nhu cầu tư vấn và mua hàng, chúng tôi sẽ cung cấp cho bạn dịch vụ chân thành và chất lượng sản phẩm, cũng như giá thấp hơn.
E-mail: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com